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            豬鼻支原體PCR檢測試劑盒價格

            產品簡介

            豬鼻支原體PCR檢測試劑盒價格
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            更新時間:2021-03-13
            訪問次數:469
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            注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

             產品名稱

             豬鼻支原體PCR檢測試劑盒價格

             英文名稱

             Mycoplasma hyorhinisPCR

             貨號

             LZP7033

            實驗過程:
            一、試劑準備
            1. DNA模板
            2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
            3.10×PCR Buffer
            4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
            5.Taq酶
            二、操作步驟
            1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
            10×PCR buffer             5μl
            dNTP mixl                 4μl
            引物1(10pM)               2μl
            引物2(10PM)              2μl
            Taq酶(2U/μl)            1μl
            DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
            ddH2O至               50 μl
            PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
            2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
            3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
            4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
            三、注意事項
            1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
            2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
            3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
            4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
            5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
            6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
            7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
            一、 試劑的準備
            從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
            設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
            試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
            熒光PCR反應液 14µL N×14µL
            酶混合物 1 µL N×1 µL
            總量 15 µL N×15µL
            1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
            7.2 qPCR反應條件
            將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
            推薦循環條件:
            1循環 50℃ for 2 min
            預變性 1循環 95℃ for 10 min
            PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
            60℃ for 60 sec
            60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
            組成及試劑配制:
            1、酶標板:一塊(96孔)
            2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
            3、 樣品稀釋液:1×20ml。
            4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
            5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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            表木栓LFABP/FABP-1(Liver Fatty acid binding protein)  肝臟型脂肪酸結合蛋白抗原TP53I8/EI24  腫瘤蛋白p53誘導蛋白8

            鴨腳樹葉堿LFABP/FABP-2(Liver Fatty acid binding protein)  肝臟型脂肪酸結合蛋白抗原TP53I13  腫瘤蛋白p53誘導蛋白13(腫瘤抑制基因)

            山柰酚-3-O-蕓香糖苷LN (laminin)  層粘連蛋白(多肽抗原)TP53I11  腫瘤蛋白P53誘導蛋白11抗體

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            三白草酮lamin A  核纖層蛋白A抗原Torc2/Crtc2  CREB轉錄共激活因子TORC2抗體

            洛伐他汀LOX-1/OLR1  凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體TORC1/CRTC1  環腺苷酸應答元件結合蛋白轉錄共激活因子TORC1抗體

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