海水派琴蟲PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Anthrone軟脂酸 分析標準品，>99%(GC)聚乙烯 6-98 Mw ~47,000

Thiomichler's ketone軟脂酸 97%聚乙烯 8-88 Mw ~67,000

Michler's ketone軟脂酸 99%四氧化三鈷 CP,Co 72.0～73.5%

Phenylfluorone正戊 GR,99%四氧化三鈷 99.9% metals basis

PMBP2-苯乙 Standard for GC,>99.5%(GC)鈷酸鋰 99.8% metals basis

PMP2-苯乙 CP,98%乙酰氯 AR,98.5%

Phenidone2-苯乙 AR,99%乙酰溴 97%

α-Naphtholbenzein2-苯乙 ≥99%, FCC, FG三乙基芐基氯化銨 98%

Azocarmine B正 GCS,≥99.8% (GC) 異丁酰氯 98%

Azocarmine G正 AR,99.0%  酰溴  95%

Thionin正 CP,98.5% 酰氯 98%

 Tartrazine正  for HPLC, ≥99.9%四丁基溴化銨 CP,98.0%

Allura Red AC正  ACS, ≥99.5%四乙基溴化銨 98%

Sunset Yellow FCF正 分析標準品蒽醌 CP

Lissamine rhodamine B正 農殘級2-甲基萘 97%

Phesafranine酸 AR,≥99.5% (GC) N,N,N',N'-四甲基-1,3-二胺 97%

富馬酸酮替芬IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/PE-CY5  PE-CY5標記的兔抗大鼠IgM

富馬酸酮替芬(標準品)Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的兔抗大鼠IgM

酮咯酸Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE  PE標記的兔抗大鼠IgM

來氟米特PTEN Blocking PeptideRabbit Anti-rat IgM/HRP  辣根過氧化物酶標記的兔抗大鼠IgM

來氟米特（標準品）FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/Gold  膠體金標記的兔抗大鼠IgM

左氧氟沙星LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/FITC  FITC標記的兔抗大鼠IgM

左氧氟沙星（標準品）SignalSilence® BRCA1 siRNA IRabbit Anti-rat IgM/Cy7  Cy7標記的兔抗大鼠IgM

氯諾昔康Voristat (SAHA)Rabbit Anti-rat IgM/Cy5.5  Cy5.5標記的兔抗大鼠IgM

氯諾昔康(標準品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys79) (D5X1S) Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/Cy5  Cy5標記的兔抗大鼠IgM

洛沙坦/氯沙坦SignalSilence® γ-Catenin siRNA I (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/Cy3  Cy3標記的兔抗大鼠IgM
海水派琴蟲PCR檢測試劑盒說明書人美洲商陸素(PWM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

人免疫反應性生長激素(irGH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃350ku

人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

人免疫球蛋白AFc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人免疫球蛋白EFc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50毫克

人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10毫克
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。