AOPP晚期氧化蛋白產(chǎn)物ELISA試劑盒

產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

血小板因子4(PF4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒異硫玫瑰紅B4'-乙 99%維B6 99%

血小板因子4變種1(PF4V1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒亞藍(lán)二氫芳樟 95%Amberlyst® 15離子交換樹脂 濕

血型糖蛋白E(GYPE)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒亞藍(lán)麥芽酚 99%Amberlyst® 15離子交換樹脂 干

受體4(SSTR4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒亞藍(lán)二苯 CPAmberlite® IRA-900 陰離子交換樹脂

煙酰腺嘌呤二核磷(NADPH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 亞藍(lán)二苯 99%717強性I型陰離子交換樹脂 AR

煙酰腺嘌呤二核磷氧化1(NOX1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒四溴酚蘭二苯 99.5%,升華純化732強苯乙烯陽離子交換樹脂 AR

煙酰腺嘌呤二核磷氧化4(NOX4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒四溴酚蘭瓊脂粉 灰分ash ≤1.5%，High gel strength(1000-1200 g/cm2)AMBERLITE IRA402 CL陰離子交換樹脂 型

煙酰腺嘌呤二核磷氧化5(NOX5)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒伊文斯藍(lán)灰分ash ≤1.5%，Low gel strength(700-900 g/cm2)蒿 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

延伸蛋白A(EloA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 伊文斯藍(lán)瓊脂 BR蒿 98%

抗氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 伊文斯藍(lán)α-淀粉 BR 98%

受體3(SSTR3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒硝化四氮唑藍(lán)耐高溫α-淀粉 BR0.98

胰蛋白(TRY)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 硝化四氮唑藍(lán)酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng) BR輔Q10 98%

胰蛋白原II(Try2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 硝化四氮唑藍(lán)性瓊脂 BR去氫表雄 99%

胰蛋白原激活肽(TAP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化硝四氮唑藍(lán)瓊脂 BR多烯紫杉 98%

胰島素原(PI)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化硝四氮唑藍(lán)乙酰培養(yǎng) BR 95%

胰淀粉α2(AMY2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 化硝四氮唑藍(lán)疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng) BR石杉 分析標(biāo)準(zhǔn)品
AOPP晚期氧化蛋白產(chǎn)物ELISA試劑盒英文名稱：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

形態(tài)學(xué)檢測是研究細(xì)胞凋亡的基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個個空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂成碎塊，此時細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個細(xì)胞變成數(shù)個大小不等的有膜包裹的凋亡小體：后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細(xì)胞吞噬、消化。上述這些形態(tài)學(xué)的變化，可以通過本試劑盒中的染色及光學(xué)顯微鏡觀察。

計算細(xì)胞凋亡率和死亡率：

細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

細(xì)胞死亡率=壞死細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

儲存：RT,避光，有效期12個月。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。